Diabetologia：激活但机能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到肝细胞自身抗锥体到注意到1标准型心血管疾病药理学疼痛的成果率在婴幼儿末期就有很好的详细描述，多个肝细胞自身抗锥体阴性的婴幼儿之中有70%在毒素叠加后10年内患上心血管疾病，而随访15年的婴幼儿这一比率提高到84%。来得之下，占药理学1标准型心血管疾病一半以上的标准型1标准型心血管疾病的发病机制还没有给与充分的科学研究。

越来越多的人开始用于分期系统来定义1标准型心血管疾病的成果：个锥体在注意到多种肝细胞自身抗锥体时转至第1前期，注意到血糖异常时转至第2前期，注意到疼痛时转至第3前期。一些多发肝细胞自身抗锥体阴性的个锥体，在1期和2期，成果较越来越慢，并发展为发病的1标准型心血管疾病。我们早先详细描述了一分组在首次验证到多种肝细胞自身抗锥体样本后将近10年无心血管疾病的极越来越慢成果者，这分组高血压人数少，但外观上非常完全一致。随后，我们找到肝细胞自身免疫特异性CD8+T细胞会中间锥体在成果减越来越慢的高血压之中基本不存在，但在近期发病和曾一度存在的心血管疾病高血压之中很容易验证到。这可能会表明，与成果高血压来得，这些高血压自身免疫中间锥体的调控增强。

更早科学研究表明，尽管调控性T细胞会(Treg)数量正常，但心血管疾病高血压存在一些机制局限性，其之中包括对IL-2的中间锥体能力下降。此外，心血管疾病高血压之中的不稳定性CD4+T细胞会可能会对调控越来越具抵抗性，表现为不稳定性T细胞会的可抑制消散，自然现象归因于的Treg和锥粘液归因于的正向Treg，以及免疫经历的CD4+T细胞会之中IL-2中间锥体消散。本科学研究的目的是详细描述了CD4+调控性T细胞会(Treg)在一小群极减越来越慢成果者之中的外观上，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

作法：BOX科学研究是一项以人群为基础的横向科学研究，在21岁以下确诊的高血压亲属之中定期检查1标准型心血管疾病的危险原因。我们早先详细描述了曾一度减越来越慢成果者的外观上，他们持续保持多重肝细胞自身抗锥体阴性超过10年，但没有注意到心血管疾病的药理学疼痛，越来越慢性或非来受虐自身免疫。随后，10名继续持续保持无心血管疾病并不愿提供大量血液样本的减越来越慢成果者纳入T和B细胞会机制分析。在目前的科学研究之中，8名越来越慢成果者(SP分组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身抗锥体阴性。所有的自发性都东南面1标准型心血管疾病成果的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身抗锥体对某些免疫的阴性中间锥体，然而，一名高血压已经东南面2期将近6年，但没有注意到药理学疼痛，一名高血压被诊断为心血管疾病，该病人72岁，在野外实验样本时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在科学研究小组之中对该小分子来进行了直接审核。分离外周血单个核细胞会(PBMCs)，采行多模板流式细胞会术和T细胞会可抑制试验审核小分子之中Treg的增益、表标准型和机制。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和回归)来进行无监督聚类分析，审核Treg表标准型。

结果：与身锥体健康小分子来得，来自越来越慢成果锥体的思绪CD4+T细胞会的监督聚类结果显示，转录的思绪CD4+ Treg增益提高，与糖皮质激素正向的TNFR相关蛋白(GITR)传达提高有关。一名HbA1c增高的高血压与成果减越来越慢者和匹配的对照分组来得，Treg谱有所区别。机制分析表明，与身锥体健康小分子来得，来自减越来越慢成果锥体的Treg介导的CD4+不稳定性T细胞会可抑制相对来说受损。表现为对不稳定性CD4+T细胞会CD25和CD134传达的可抑制提高。

所示1 系统地的表标准型分析结果显示，CD4+Treg亚标准型在越来越慢成果队列之中提高。由FlowSOM转换成的Treg室，群聚在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标明物传达鉴别出10个元簇:思绪T细胞会_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞会;HLA-DR + GITR +思绪T细胞会;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用于9个不同Treg标明转换成的10个元簇的MST。每个路由器亦然一个集群(100个集群)，越来越大的元集群(10个元集群)在路由器分组周围制做。每个路由器之中的面包所示暗示单个标明的传达级别。(b)每个元聚类的热所示，以结果显示整锥体而言标明传达。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转换成所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对丰度为每个metacluster装入新线所示(丰度> 0.05%)确定为HD和SP分组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞会(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞会(l)。橙色左上角亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用于CITRUS的预测模标准型证实，Treg增益的提高是成果减越来越慢的标志。分级制度离子通道(a - f)和柑橘分析(g-k)尤其SP自发性和匹配的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞会上的不同。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的亦然性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达来进行分离，各种类型FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及小分子SP 606(橙色)之中CD25+ cd127的增益汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道偏序的装入新线所示;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达数值纹理，斜线突出的簇被识别为SP和HD队列之间的不同。(j)装入新线所示结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组之中，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相对丰度(比率)。(k)直方所示结果显示每个簇的表标准型(粉红色)和Treg标明相对传达与取材传达(深蓝色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。取材与所有其他簇之中标明的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

所示3 与身锥体健康献血者来得，成果减越来越慢者思绪treg的GITR提高。每个思绪CD4+T细胞会元簇(思绪T细胞会_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞会;HLA-DR + GITR +思绪T细胞会;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个传达标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的传达热所示(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇之中所有HD(粉红色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR传达串联，结果显示直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橙色)所有小分子包括，p< 0.05(深蓝色)小分子SP 606和匹配的HD不包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR传达，从分级制度离子通道，从所有HD(粉红色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橙色)串联，结果显示直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

所示4 来自减越来越慢成果的CD4+ treg细胞会高度集中不稳定性CD4+T细胞会的能力下降。SP分组用深蓝色的新线和左上角暗示，HD分组用灰色的新线和左上角暗示，橙色的新线/左上角暗示小分子sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会来进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标明为CFSE, Treg按仔细观察的比率高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再造细胞会，指导3天后来进行流式细胞会术验证。(a-d)与CD4+需要的话者相对应的treg指导(继发性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者指导。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE可抑制百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制百分比。用于阴性对照(转录的响应细胞会不含treg)计算可抑制百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

所示5 不稳定性CD4+T细胞会对减越来越慢成果的T细胞会再造的可抑制越来越敏感。SP分组用深蓝色的新线和左上角暗示，HD分组用灰色的新线和左上角暗示，橙色的新线/左上角暗示小分子sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会来进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标明，treg按仔细观察的比率高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再造细胞会，指导3天后来进行流式细胞会术(CD25反染)和细胞会因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同完成指导。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE可抑制%-(b)。(c,d) CD25可抑制%-(c)和CD134可抑制%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导之中的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

结论：我们推论的结论是，来自减越来越慢成果子的再造思绪CD4+Treg在GITR传达之中给与了构建和丰富，合理化了进一步科学研究Treg在1标准型心血管疾病风险个锥体之中的表征的必要性。

中文翻译注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28